一(yī)，測定標(biāo)準(zhǔn)

參(cān)考(kǎo)食品國家(jiā)標(biāo)準(zhǔn)：GB 4789.2-2016《食品安(ān)全(quán)國家(jiā)標準(zhǔn) 食品(pǐn)微生(shēng)物(wù)學檢驗(yàn) 菌(jūn)落(là)總(zǒng)數(shù)測定》。

二(èr)，操(cāo)作過(guò)程(chéng)

1，前期(qī)準(zhǔn)備：

根(gēn)據國(guó)家標準，提前準(zhǔn)備好要(yào)用(yòng)的(dí)平(píng)板(bǎn)計數瓊脂(zhī)，平皿(mǐn)，試(shì)管，稀(xī)釋(shì)液（生理鹽水），三角燒(shāo)瓶(píng)等(děng)，相應(yīng)的材料(liào)進行(háng)滅菌(jūn)處(chǔ)理(lǐ)（幹熱滅菌(jūn)或高(gāo)壓(yā)滅菌）。

2，接收樣(yàng)品：

收(shōu)到樣品後(hòu)，確認樣(yàng)品(pǐn)包裝是(shì)否完好，登記樣品(pǐn)信(xìn)息，並將(jiāng)其保(bǎo)存(cún)在2~8℃冰箱中，然後(hòu)在取(qǔ)樣(yàng)時取出(chū)。

3，樣(yàng)品處理：

按(àn)照作(zuò)業指導(dǎo)書(shū)操作，仔細閱讀實(shí)驗要求(qiú)。一般(bān)實驗室(shì)收到的(dí)是幹粉(fěn)樣品，固(gù)體(tǐ)樣品，或者液體樣(yàng)品等。假如收(shōu)到幹粉樣品(pǐn)，那麼首(shǒu)先需(xū)要將(jiāng)其配(pèi)置成水溶液（即(jí)水化）。根(gēn)據(jù)實驗(yàn)要(yào)求及經驗，進行(háng)預(yù)判，預估稀(xī)釋液倍數(shù)，溶解即可。

4，實(shí)驗(yàn)前準備：

4.1實驗操作最(zuì)好在(zài)超淨台(tái)或者(zhě)生物(wù)安全(quán)櫃(guì)裏(lǐ)操(cāo)作，需要(yào)把(bǎ)超淨台或者生物安(ān)全櫃提前清理，消(xiāo)毒處理，確保實驗環境無菌。

4.2提(tí)前把要(yào)用(yòng)到(dào)的(dí)平(píng)皿(mǐn)，試管(guǎn)，稀釋液(yè)等(děng)放到(dào)操(cāo)作(zuò)台上(shàng)紫(zǐ)外(wài)殺菌。

5，實驗操作：

5.1稀釋(shì)

將樣品(pǐn)從冰(bīng)箱中(zhōng)取出(chū)達到(dào)室溫(wēn)後(hòu)開(kāi)始取(qǔ)樣，在(zài)超潔淨台或(huò)者生物安全櫃(guì)下(xià)先(xiān)用少(shǎo)許稀(xī)釋(shì)液（選取的生理(lǐ)鹽水(shuǐ)）進行水化後吸入無(wú)菌(jūn)瓶(píng)或袋中(zhōng)，再(zài)用剩(shèng)餘的稀釋液進行洗滌並(bìng)全部轉入無(wú)菌(jūn)瓶或(huò)袋(dài)中(zhōng)。

洗滌轉(zhuǎn)移時注(zhù)意(yì)樣品瓶蓋的(dí)清(qīng)洗和無菌操(cāo)作，將(jiāng)全部的水(shuǐ)化(huà)液進行(háng)均質混(hùn)匀(yún)，一般作為(wéi)原液立刻進行接種(zhǒng)；再取25ml到(dào)225ml稀釋液中(zhōng)均(jūn)質(zhì)混匀(yún)，製成(chéng)10-1梯(tī)度樣品匀液(yè)。

用1ml無菌吸(xī)管取1:10的樣(yàng)液(yè)到(dào)9ml生(shēng)理(lǐ)鹽(yán)水(shuǐ)試(shì)管(guǎn)中，製成1:100的(dí)樣(yàng)液(yè)，以此類推(tuī)。再(zài)將幾(jī)個稀釋度的(dí)樣液(yè)接種到(dào)提前(qián)做好標記的(dí)無菌平(píng)皿(mǐn)中。

5.2傾注平板

將(jiāng)提(tí)前在水浴鍋裏涼(liáng)至(zhì)46℃的平(píng)板(bǎn)計數營養(yǎng)瓊脂(zhī)培(péi)養(yǎng)基注(zhù)入平(píng)皿(mǐn)約15ml，並轉動平(píng)皿，混合(hé)均匀。同(tóng)時將(jiāng)營(yíng)養瓊脂培養基(jī)傾入(rù)加(jiā)有(yǒu)1ml稀(xī)釋液(yè)（不(bù)含樣(yàng)品）的滅菌平皿內(nèi)作空(kōng)白(bái)對照。傾(qīng)注過(guò)程(chéng)一(yī)般左(zuǒ)手拿平皿(mǐn)，右(yòu)手拿瓊脂瓶(píng)，左手將(jiāng)平(píng)皿(mǐn)打開30°左右的縫隙(xì)，傾(qīng)注瓊脂大(dà)約(yuē)到平皿(mǐn)底的二(èr)分之一處，左三(sān)圈(quān)，右三(sān)圈輕(qīng)輕(qīng)混匀，然後放到台麵(miàn)上(shàng)。待瓊(qióng)脂凝固(gù)後(hòu)，翻(fān)轉平板(bǎn)，置(zhì)36±1℃溫箱(xiāng)內(nèi)培養48±2h。

5.3觀察(chá)計數(shù)

24h觀察檢(jiǎn)測結果有無異(yì)常(cháng)現象，是(shì)否有(yǒu)蔓(màn)延菌落出(chū)現(xiàn)。48h再按照(zhào)GB 4789.2的要求進(jìn)行菌落計(jì)數。在(zài)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析後，選取檢(jiǎn)測(cè)結果的(dí)平(píng)均(jūn)值為(wéi)最(zuì)終(zhōng)數據(jù)。

三(sān)，注意事(shì)項(xiàng)

1，當無(wú)法預(yù)判(pàn)樣品(pǐn)菌落(là)總數含量時，需(xū)要梯度(dù)稀釋(shì)，此步(bù)驟尤其(qí)關鍵(jiàn)，必須(xū)盡可能(néng)地減少誤差(chà)。

2，傾注用培養(yǎng)基應(yīng)在46℃水浴內保(bǎo)溫，溫度(dù)過(guò)高會(huì)影(yǐng)響(xiǎng)細(xì)菌生長，過(guò)低瓊(qióng)脂易(yì)凝(níng)固，不能與菌液(yè)充(chōng)分(fēn)混匀(yún)。如無(wú)水浴條(tiáo)件(jiàn)，應(yīng)以(yǐ)皮膚(fū)感受(shòu)較熱而(ér)不燙(tàng)為(wéi)宜(yí)。

3，傾注培(péi)養基的(dí)量規(guī)定不(bù)一(yī)，從(cóng)12~20ml不等(děng)，一般以(yǐ)15ml較為適宜(yí)，平板過(guò)厚(hòu)會影(yǐng)響觀察，太薄(báo)又易於幹裂(liè)。傾注(zhù)時(shí)，培(péi)基底(dǐ)部(bù)如有(yǒu)沉(chén)澱(diàn)物，應(yīng)將底部棄去，以免與(yǔ)菌落混淆而(ér)影(yǐng)響計數(shù)觀察(chá)。

4，傾注過程力度一定掌(zhǎng)握好(hǎo)，絕不(bù)能把瓊脂濺(jiàn)出來(lái)。

5，為使菌(jūn)落(là)能(néng)在(zài)平板上(shàng)均匀分布(bù)，檢液加入(rù)平皿時要盡可(kě)能(néng)放(fàng)在中央部(bù)位，然(rán)後(hòu)應盡快傾注(zhù)培養(yǎng)基並旋轉混匀，可(kě)正(zhèng)反兩(liǎng)個方向(xiàng)旋(xuán)轉，檢樣從開始稀釋到傾注最後一個平皿所(suǒ)用時間不易(yì)過長，以防止細菌(jūn)有所死(sǐ)亡或繁殖。

6，瓊(qióng)脂(zhī)培(péi)養(yǎng)基放水(shuǐ)浴鍋前一(yī)定要混(hùn)合均匀，以(yǐ)防出現平(píng)皿(mǐn)不凝(níng)固現象；拿出(chū)傾(qīng)注(zhù)時要用(yòng)噴(pēn)有75%酒(jiǔ)精的抹布擦拭(shì)幹(gān)淨(jìng)。

7，冷卻(què)的過程不要著急，冷(lěng)卻充分後(hòu)再倒(dǎo)置放進培養箱培養(yǎng)，放置的時候要(yào)盡量(liáng)避免放(fàng)到(dào)風機(jī)口處，每(měi)摞(luò)不(bù)要超過6個(gè)平皿。

8，檢測結束(shù)後所(suǒ)有的(dí)稀(xī)釋液樣品可(kě)放到(dào)冰箱裏0-5℃冷藏，以(yǐ)備實(shí)驗(yàn)出(chū)錯時(shí)再用(yòng)。

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